{"id":9023,"date":"2023-06-21T12:02:49","date_gmt":"2023-06-21T15:02:49","guid":{"rendered":"https:\/\/higiene.edu.uy\/inmunologia\/?p=9023"},"modified":"2023-06-21T12:02:49","modified_gmt":"2023-06-21T15:02:49","slug":"defensa-tesina-de-grado-bach-belen-marquez","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/higiene.edu.uy\/inmunologia\/2023\/06\/21\/defensa-tesina-de-grado-bach-belen-marquez\/","title":{"rendered":"Defensa Tesina de Grado: Bach. Bel\u00e9n M\u00e1rquez"},"content":{"rendered":"\n<h4 class=\"has-text-align-center wp-block-heading\"><strong>\u201c<strong><strong><em>Producci\u00f3n de calibradores recombinantes quim\u00e9ricos para ensayos serol\u00f3gicos COVID-19<\/em><\/strong><\/strong>\u201d<\/strong><\/h4>\n\n\n\n<p><strong>Estudiante:<\/strong>\u00a0Bach. Bel\u00e9n M\u00e1rquez<\/p>\n\n\n\n<p><strong>Director de Tesina:<\/strong>\u00a0Dr. Gabriel Lassabe<\/p>\n\n\n\n<p>Los ensayos serol\u00f3gicos son un tipo de inmunoensayo con los que se detectan anticuerpos en suero, ya sea para el diagn\u00f3stico de una infecci\u00f3n reciente, detecci\u00f3n de alergias o evaluaci\u00f3n de la calidad de la respuesta inmune humoral a largo plazo, entre otras cosas. Los inmunoensayos requieren calibradores y controles para poder distinguir resultados positivos y negativos, as\u00ed como para la cuantificaci\u00f3n. Los calibradores para ensayos serol\u00f3gicos suelen ser sueros que portan anticuerpos contra el ant\u00edgeno de inter\u00e9s, lo cual acarrea desventajas: debido a su naturaleza policlonal no pueden ser completamente caracterizados, su reproducibilidad no es \u00f3ptima y, al ser finitos, es necesario buscar nuevos sueros positivos a ser validados, aumentando el tiempo y costo de los ensayos. Una alternativa es la producci\u00f3n&nbsp;<em>in vitro<\/em>&nbsp;de calibradores recombinantes que mimeticen a la clase de anticuerpos a detectar, lo que resuelve las dificultades anteriores ya que \u00e9stos pueden producirse en forma eficiente e ilimitada, obtenerse en alta pureza (lo cual mejora la reproducibilidad de los ensayos), ser completamente caracterizados y almacenarse en condiciones que optimicen su estabilidad.<\/p>\n\n\n\n<p>Este proyecto se centr\u00f3 en producir dos calibradores recombinantes quim\u00e9ricos para ensayos de serolog\u00eda de SARS-CoV-2, constituidos por un nanobody fusionado a la regi\u00f3n Fc de IgG1 humana. Se llama nanobody (Nb) a la forma recombinante del dominio VHH (variable) de anticuerpos de cadena pesada (HcAbs,&nbsp;<em>Heavy-chain-only Antibodies<\/em>), producidos por cam\u00e9lidos. Los Nbs presentan gran estabilidad conformacional y solubilidad, lo que permite su expresi\u00f3n recombinante en ausencia del resto de la cadena pesada o fusionados a otros dominios proteicos. A partir de Nbs previamente seleccionados contra ant\u00edgenos de SARS-CoV-2 se construyeron vectores de expresi\u00f3n para dos calibradores Nb-Fc, uno de ellos reactivo contra la prote\u00edna de nucleoc\u00e1pside, y el restante reactivo contra el dominio de uni\u00f3n al receptor de la prote\u00edna Spike.<\/p>\n\n\n\n<p>Los calibradores fueron expresados en c\u00e9lulas HEK293-T y purificados por cromatograf\u00eda de afinidad. Se los caracteriz\u00f3 de forma general mediante t\u00e9cnicas como espectrometr\u00eda de masas, gel-filtraci\u00f3n (determinaci\u00f3n de peso molecular), ELISA (evaluaci\u00f3n de funcionalidad y estabilidad) e interferometr\u00eda de biocapa (obtenci\u00f3n de par\u00e1metros cin\u00e9ticos y termodin\u00e1micos indicativos de afinidad).<\/p>\n\n\n\n<p>Finalmente, los calibradores fueron incorporados a ensayos serol\u00f3gicos para la detecci\u00f3n cualitativa de IgG anti-N y cuantificaci\u00f3n de IgG anti-RBD. Para el primer caso, se logr\u00f3 un 82.5% de sensibilidad y 100% de especificidad, las curvas de calibraci\u00f3n fueron reproducibles y permitieron normalizar ensayos donde se evalu\u00f3 un n\u00famero alto de sueros. Para el ensayo de cuantificaci\u00f3n de IgG anti-RBD, se logr\u00f3 validar al calibrador recombinante al establecer una correlaci\u00f3n entre la cuantificaci\u00f3n con el mismo y con un est\u00e1ndar internacional, con la ventaja adicional de reducir el error relativo al lograr obtener curvas de calibraci\u00f3n lineales. En suma, ambos calibradores Nb-Fc demostraron ser una alternativa robusta al uso de sueros para la estandarizaci\u00f3n de inmunoensayos.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>\u201cProducci\u00f3n de calibradores recombinantes quim\u00e9ricos para ensayos serol\u00f3gicos COVID-19\u201d Estudiante:\u00a0Bach. 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